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Les enzymes de restriction sont fabriquées par les bactéries pour digérer l'ADN des organismes envahisseurs, et l'enzyme de restriction HindIII est souvent utilisée pour dégrader l'ADN lambda. Il produit une série de fragments reproductibles de tailles différentes appelées échelle d'ADN. En comparant la distance parcourue par les normes sur une échelle logarithmique, on peut déterminer la taille des fragments d'ADN analysés. Ce marqueur de poids moléculaire d'ADN peut être utilisé pour analyser la taille de l'ADN produit lors de l'isolement de gènes et dans des expériences de génie génétique. Il peut également être utilisé pendant la réaction en chaîne par polymérase (PCR), dans laquelle de petites quantités d'ADN ou d'ARN sont amplifiées pour produire de grandes quantités de produit. Les techniques de PCR sont couramment associées aux tests de paternité et à la médecine légale, mais elles sont également très courantes dans la recherche médicale et biologique fondamentale. Des marqueurs spéciaux de poids moléculaire sont disponibles pour les produits plus petits générés à partir de certains types de PCR ou de petites molécules d'ARN.
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Une autre source de différence peut venir du protocole: l'absence de béta-mercapto-éthanol (ou de DTT) dans le bleu de migration permettant de préserver les ponts disulfures, font que les 2 sous-unités d'une protéine restent attachées et migrent sous la forme d'une seule entité de grande taille. Cette différence peut tout simplement être due à une estimation imprécise due au marqueur de poids. En effet il faut avoir à l'esprit, qu'un marqueur pré-coloré est pratique mais reste imprécis. Il permet d'évaluer la taille de sa protéine d'un coup d'œil, mais ne permettra jamais d'évaluer précisément sa taille réelle. Une mesure précise doit être effectuée avec un marqueur non coloré. En effet les colorants qui sont greffés sur les protéines qui constituent le marqueur modifient leur taille et donc leur migration.
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Répondre à la discussion Affichage des résultats 1 à 3 sur 3 02/01/2011, 12h25 #1 Chonchon3811 Marqueur de taille ------ Bonjour à tous! Lors d'un TP de biochimie je devais déterminer le masse moléculaire de protéines par électrophorèse. J'ai pour cela utilisé un marqueur de taille contenant 13 molécules. Mais j'ai un petit soucis, après révélation, seules 10 bandes apparaissent pour le marqueur de taille... Du coup je suis coincée car je ne vois pas comment identifier les bandes apparues et leur associer une masse moléculaire. Y a-t-il une astuce ou mes résultats sont-ils inexploitables? Merci à tous ----- 02/01/2011, 13h20 #2 Emilietoc Re: Marqueur de taille Bonjour, c'est assez classique avec les marqueurs de taille, pour les voir toutes il faut des gels à gradient. La solution c'est de se baser sur l'épaisseur des bandes, en général il y en a des plus importantes, ou alors l'agencement entre elle, il faut regarder sur la notice. 02/01/2011, 13h47 #3 Merci beaucoup pour le coup de main!
Les acides aminés impliqués dans la réaction de coloration sont ceux avec une chaîne latérale amine, tels que Arg et Lys. Le tryptophane peut-il être marqué avec les composés trihalogénés des gels biorad ou du colorant fluorescent? Nous ne disposons pas d'information concernant le colorant interférant avec les systèmes de gel Bio-rad ou le colorant fluorescent qui lui est associé. Seuls les clients connectés peuvent laisser un avis.
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