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(Les dilutions éventuelles des solutions protéiques sont réalisées en NaCl à 9 g/L. ) - réactif de Gornall 4 mL (réactif très stable); - homogénéiser, attendre 30 minutes à l'obscurité et lire au spectrophotomètre à 540 nm. La méthode est évidemment adaptable en microplaque à puits. /analyschim/photons/ JF Perrin maj nov 2011/2013 page 3/3 Document n°3 Dosage des protéines par la méthode dite au BCA En milieu alcalin, les protéines réduisent C2+ en Cu+. Le sel de l'acide bicinchoninic (BCA) forme un complexe coloré mesurable à 562 nm avec les ions Cu+. Méthode compatible avec la plupart des surfactants jusqu'à 5%. Dosage des proteines par la methode du biuret moi. Méthode influencée par la composition en acides aminés des protéines mesurées:facteur 1 à 3. Méthode à réaliser en durée contrôlée (cinétique complexe, évolution dans le temps). Les chélateurs de Cu(II), donc l'EDTA, les agents réducteurs (thiols, vitamine C... ) et les solutions à très haut pouvoir tampon interfèrent. Voir par exemple pour les interférents. Selon les réactifs le domaine de praticabilité de la méthode est du type 0, 1-2 mg/mL ou 0, 01-0, 2 mg/mL.
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Il est composé d'un mélange de tungstate de sodium et de molybdate de sodium en solution dans de l'acide phosphorique et de l'acide chlorhydrique. Ce réactif permet la réduction des acides aminés aromatiques ( tyrosine et tryptophane) conduisant à la formation d'un complexe coloré bleu foncé dont on mesurera l'absorbance entre 650 et 750 nm. Le protocole à suivre pour réaliser un dosage selon la méthode de Lowry est de mélanger la solution alcaline (solution de carbonate de sodium alcalin à 20g/L dans 0. Tp Dosage Des Proteines Par La Methode De Biuret.pdf notice & manuel d'utilisation. 1M de soude) à la solution de protéines à doser, puis d'ajouter une solution de sulfate de cuivre et de tartrate double de sodium et de potassium. Laisser incuber au minimum 10 minutes à température ambiante. Ajouter ensuite le réactif de Folin (dilué au demi) sous agitation rapide. Attendre 30 minutes, et mesurer la DO à 750 nm. Avantages [ modifier | modifier le code] Cette technique bénéficie d'une meilleure sensibilité que la méthode du Biuret (augmentation d'un facteur cent). Il est ainsi possible de réaliser des mesures dans des mélanges pauvres en protéines ou dans des solutions relativement diluées.
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