Abonnement Recepteur Starsat – Dosage Des Glucides Par Spectrophotométrie Cours
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ROMBAUTS avec la collaboration technique de Ginette LEPINE et Maryvonne Le GOFF Service de Biochimie et de Nutrition, Centre national de Recherches zootechniques, Jouy-en … Dosage … I°) Dosage par étalonnage par spectrophotomètrie: la Bétadine La Bétadine est un antiseptique dermatologique. Les principales techniques utilisées pour réaliser un dosage par étalonnage sont la spectrophotométrie et la conductimétrie. Cette réaction est catalysée par une enzyme, la glucose oxydase. Dans le cas ou l'on dispose d'une technique qui permet de suivre l'augmentation de la concentration du produit formé en fonction du temps, on commence par tracer la courbe [P]= f(t) … 100 159, 5 1, 0 CuSO CuSO CuSO sol CuSO m c MV c mol L On retrouve bien la valeur attendue aux erreurs expérimentales près Spectrophotométrie. Tp dosage du glucose par spectrophotométrie. C TP 13 Interaction électrostatique et champ électrique. Le diiode est une espèce colorée, de couleur jaune/brun. Synthèse à partir du D-Glucose par le procédé de Reichstein-Grüssner En 1933, Tadeusz Reichstein, chimiste polonais, met au point un procédé industriel de synthèse de l'acide L-ascorbique à partir du D-Glucose, il fût nommé le procédé de Reichstein-Grüssner.
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L'extraction se fait à partir de 10 mg de poudre sèche dans 1, 5 mL d'acétone à 80%. Après agitation, les échantillons sont centrifugés à 14000 g pendant 5 min. Les teneurs en chlorophylles a et b sont calculées à partir de la lecture des absorbances à 663 nm (A663) et à 642 nm (A642) contre un blanc contenant uniquement de l'acétone. Les concentrations en pigment sont données par les équations suivantes: - Chl a (µg/mL) = (12, 58 x A663) - (2, 93 x A642) - Chl b (µg/mL) = (21, 14 x A642) - (5, 09 x A663) Les résultats sont ensuite exprimés en mg de pigment par g de matière sèche. Dosage des glucides par spectrophotométrie infrarouge. III. 9 Extraction et dosage de l'azote soluble, insoluble et total (Kjeldahl) L'azote insoluble et l'azote total sont dosés suivant le principe de la méthode de Kjeldahl, dont est déduite la teneur en azote soluble. Les composés azotés des échantillons secs en poudre (50 mg) sont minéralisés à l'aide d'acide sulfurique concentré, contenant une concentration élevée de potassium (ce qui permet d'élever le point d'ébullition du mélange) et en présence de sélénium (catalyseur), pour former du sulfate d'ammonium.
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Un tube 0 ou blanc doit impérativement être réalisé pour annuler l'absorbance due aux réactifs eux-mêmes. Ce tube ne contient pas d'échantillon de composé à doser. La réalisation d'une gamme d'étalonnage demande beaucoup de précision (utilisation de fioles jaugées, de pipettes... Dosage des glucides par spectrophotométrie d. ), et doit être, de préférence, réalisée dans les mêmes conditions que les essais et par le même opérateur. Réalisation d'un tableau colorimétrique [ modifier | modifier le code] La réalisation d'un tableau colorimétrique permet d'éviter des erreurs lors de la réalisation de protocoles et de noter les résultats. Voici en exemple le tableau colorimétrique d'un dosage du glucose par le DNS. Tableau colorimétrique (résultats expérimentaux) N° de tube 0 1 2 3 4 5 x1 x2 Solution étalon de glucose à 0, 01 mol/L en mL 0, 3 0, 6 0, 9 1, 2 1, 5 Prise d'essai en mL 0, 5 1, 0 Eau distillée en mL 18, 0 17, 7 17, 4 17, 1 16, 8 16, 5 17, 5 17, 0 DNS (réactif) en mL 2, 0 Absorbance à 350 nm pour un tube/une cuve donné(e) 0, 205 0, 494 0, 748 1, 022 1, 280 0, 668 1, 340 Quantité de glucose en µmol 3, 0 6, 0 9, 0 12, 0 15, 0 7, 9 hors gamme Lecture des résultats [ modifier | modifier le code] En bleu, la droite obtenue par une gamme d'étalonnage.
III. 5. 1 Extraction des glucides Les échantillons (10 mg de poudre sèche) sont incubés avec 0, 5 mL d'éthanol à 80% pendant 20 min à 80°C. Après 5 min de centrifugation à 10000 g, le surnageant est récupéré et le culot est lavé en renouvelant cette opération. Les surnageants constituent l'extrait de sucres solubles qui sont, le cas échéant, utilisés pour les différents dosages des sucres solubles. Quant aux culots, ils contiennent l'amidon qui reste insoluble dans l'éthanol. L'amidon est extrait selon la méthode décrite par Outlaw et Manchester (1979), en reprenant le culot dans 1, 5 mL d'une solution de KOH 0, 2 M et d'éthanol 100 mM. Après agitation, une incubation de 20 min à 80°C est réalisée. Les échantillons sont ensuite placés à 4°C jusqu'au dosage de l'amidon. Dosage des glucides par spectrophotométrie 1. Pour les échantillons particulièrement riche en amidon, tel III. Matériels et méthodes 55 que les cotylédons, afin de parfaitement solubiliser l'amidon sous l'action du KOH, il convient de laisser les extraits d'amidon reposer au moins 24h et de renouveler l'incubation de 20 min à 80°C avant analyse.