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Préambule: les informations, valeurs, tableaux, graphes et questions présentées ci-dessous ne sont qu'une partie du sujet étudiée. Certaines questions ne figurent pas dans le document support de l'activité mais ont été posées au cours des séances. L'orientation d'un micro-organisme est la première étape vers son identification: cela consiste à déterminer la famille et/ou le genre auquel il appartient. Cette orientation se fait par recherche de caractères culturaux et biochimiques du métabolisme respiratoire, glucidique et protéique. 1 ère partie: les grandes étapes de la démarche d'orientation / identification Observation de la culture de départ: mise en évidence des caractères culturaux (exigeant ou non-exigeant, mésophile, thermophile... Voie d'attaque du glucose. ) et étude morphologique macroscopique des colonies. Étude microscopique (état frais, coloration de Gram => morphologie, mode de groupement, mobilité, Gram). Réalisation des tests enzymatique d'orientation rapides (oxydase ou catalase). Détermination d'un genre ou d'un groupe de genres (par orientation dichotomique).
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- Terminer l'orientation en vérifiant que tous les caractères sont bien concordants avec le genre/famille trouvé Procéder de la même façon pour la souche 2
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Les bactéries sont oxydatives. 3 Tubes O et F entièrement jaunes → il y a eu virage de l'indicateur coloré à cause de la production d'acide dans tout le tube: les bactéries ont utilisé le glucose en présence et en absence d'oxygène. Les bactéries sont donc fermentatives. AT6 Type respiratoire et voie d’attaque du glucose – STLBIOTEKANGLET64. 4 Haut du tube O bleu → bactéries inertes au glucose: utilisation des peptides comme source d'énergie. [ modifier] Précisions Le type oxydatif ou fermentatif est étroitement lié avec le type respiratoire de la bactérie. On peut donc vérifier la cohérence des résultats avec le milieu viande-foie. [ modifier] Voir Aussi Recherche du type respiratoire Portail de la biologie
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Cette technique permet la détermination du métabolisme oxydation ou fermentatif de la bactérie, autrement dit: dégrade-t-elle le glucose via le cycle de Krebs ou utilise-t-elle une autre voie? Principe Dans le milieu Hugh et Leifson auquel on ajoute du glucose, on cherche le métabolisme de la bactérie. Le milieu est régénéré (il a été maintenu en surfusion pour que les gaz dissous dans le milieu s'en échappent). Il possède donc un gradient de concentration en dioxygène (l'O 2 est plus abondant en surface qu'en profondeur). Les bactéries qui utilisent le glucose produisent des acides. Recherche de la voie d'attaque du glucose | owlapps. La visualisation des productions d'acide est indiquée par le changement de couleur du bleu de bromothymol, indicateur coloré de pH contenu dans le milieu. À la fin de l'incubation, on observe le changement de couleur du milieu pour déterminer le type oxydatif ou fermentatif. Composition du milieu de Hugh et Leifson:→voir Hugh et Leifson Attention: c'est après la régénération qu'il faut ajouter une solution de glucose à 10.
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Autrement, elle pourrait se caraméliser. Technique [ modifier | modifier le code] On utilise une culture pure pour ne pas avoir de résultats faussés. On utilise deux milieux coulés en tube: la surface du premier est exposée à l'air (Tube O) tandis que l'autre est isolé de l'air avec de la paraffine liquide (Tube F). Régénération à 100 °C pendant 30 minutes. On ajoute la solution de glucose à 10% dans les tubes contenant la gélose surfusion (10 gouttes environ) à l'aide d'une pipette pasteur. Recherche de la voie d'attaque du glucose — Wikipédia. Laisser refroidir le milieu jusqu'à ce qu'il se durcisse (à mettre sous un robinet d'eau froide pour gagner du temps par exemple). On ensemence les tubes avec une pipette pasteur boutonnée ou avec une anse. On ajoute de la paraffine dans le tube F, sur une hauteur de 1 cm environ. Incubation à 37 °C pendant 24 à 48 h. Lecture [ modifier | modifier le code] Résultats possibles ( O: Ouvert - F: Fermé) 1 Tubes tel qu'ils doivent être après ensemencement 2 Haut du Tube O jaune → il y a eu un changement de couleur dû à l'acidification dans le haut du tube O uniquement: les bactéries ont besoin d'oxygène pour dégrader le glucose.
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English Cled agar La gélose CLED (Cystine Lactose Electrolyte Deficient) est utilisée pour l'isolement, la numération et la différenciation des micro-organismes urinaires. En 1960, Sandys a étudié un moyen permettant d'éviter l'envahissement... Mueller–Hinton La gélose Mueller–Hinton est un milieu solide standardisé recommandé pour l'étude de la sensibilité des bactéries aux agents antimicrobiens par la méthode de diffusion ou de dilution en gélose.... Gélose nutritive ordinaire Relativement simplifiée, la formulation apporte les éléments nutritifs nécessaires à la croissance d'une grande variété de germes non exigeants, Il est recommandé par l'American Health Association pour la numération des bactéries dans les eaux... Voie d attaque du glucose avec. Bouillon nutritif Le Bouillon Nutritif est un milieu largement utilisé pour la culture des micro-organismes peu exigeants. Il est recommandée dans de nombreuses méthodes standardisées d'analyses des aliments, des laitages, de l'eau et d'autres produits... Gélose Columbia La gélose Columbia est un milieu très nutritif permettant la culture et l'isolement d'une grande variété de microorganismes et plus particulièrement des germes très exigeants (tels que streptocoques et pneumocoques).
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