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Cette technique permet la détermination du métabolisme oxydation ou fermentatif de la bactérie, autrement dit: dégrade-t-elle le glucose via le cycle de Krebs ou utilise-t-elle une autre voie? Principe [ modifier | modifier le code] Dans le milieu Hugh et Leifson auquel on ajoute du glucose, on cherche le métabolisme de la bactérie. Le milieu est régénéré (il a été maintenu en surfusion pour que les gaz dissous dans le milieu s'en échappent). Il possède donc un gradient de concentration en dioxygène (l'O 2 est plus abondant en surface qu'en profondeur). Les bactéries qui utilisent le glucose produisent des acides. Liste milieux de culture microbiologique. La visualisation des productions d'acide est indiquée par le changement de couleur du bleu de bromothymol, indicateur coloré de pH contenu dans le milieu. À la fin de l'incubation, on observe le changement de couleur du milieu pour déterminer le type oxydatif ou fermentatif. Composition du milieu de Hugh et Leifson [ modifier | modifier le code]:→voir Hugh et Leifson Attention: c'est après la régénération qu'il faut ajouter une solution de glucose à 10.
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Autrement, elle pourrait se caraméliser. Technique On utilise une culture pure pour ne pas avoir de résultats faussés. On utilise deux milieux coulés en tube: la surface du premier est exposée à l'air (Tube O) tandis que l'autre est isolé de l'air avec de la paraffine liquide (Tube F). Régénération à 100 °C pendant 30 minutes. On ajoute la solution de glucose à 10% dans les tubes contenant la gélose surfusion (10 gouttes environ) à l'aide d'une pipette pasteur. Laisser refroidir le milieu jusqu'à ce qu'il se durcisse (à mettre sous un robinet d'eau froide pour gagner du temps par exemple). AT6 Type respiratoire et voie d’attaque du glucose – STLBIOTEKANGLET64. On ensemence les tubes avec une pipette pasteur boutonnée ou avec une anse. On ajoute de la paraffine dans le tube F, sur une hauteur de 1 cm environ. Incubation à 37 °C pendant 24 à 48 h. Lecture 1 Tubes tel qu'ils doivent être après ensemencement 2 Haut du Tube O jaune → il y a eu un changement de couleur dû à l'acidification dans le haut du tube O uniquement: les bactéries ont besoin d'oxygène pour dégrader le glucose.
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Régénérer à 100°C pendant 30 minutes en dévissant un petit peu le bouchon pour laisser l'air s'échapper. Laisser refroidir le milieu jusqu'à ce qu'il durcisse (par exemple, gagner du temps avec un robinet d'eau froide). Utiliser une pipette pasteur fermée pour ensemencer le tube à essai en fessant une piqure centrale profonde. Voie d attaque du glucose pour. Viser partiellement le bouchon du tube pour laisser l'oxygène pénétrer dans le tube à essai. Incuber à 37°C pendant 24 heures à 48 heures. Lecture, interprétation [pic 1] On observe aucun changement avant et après ensemencement donc on peut conclure que la souche de bactérie étudiée est inerte vis-à-vis du glucose. Le pH du milieu reste vert donc a un pH neutre (environ 7).
- souche 2: observation de bactéries polymorphes, certaines sous forme de bâtonnets très courts, d'autres presques ovalaires, roses avec coloration bipolaire, se déplaçant lentement de façon sinueuse. Interpréter les observations faites pour chacun des souches testées 2. Lecture de l'isolement réalisé sur GNO (ou GTS pour Gélose Trpypticase Soja soit TSA pour Trypticase Soy agar en anglais) milieu non sélectif sur lequel l'isolement est réalisé en dernier en jour 1) Conditions d'incubation: 36 h, 37 °C L'isoelement a-t-il été correctement réalisé? Recherche de la voie d'attaque du glucose | owlapps. Rappel: isoler consiste à séparer les micro-organismes à la surface d'un milieu nutritif gélifié, de manière à ce que, après culture, on obtienne des colonies bien distinctes L'isolement permet-il de valider la pureté de la suspension préparée en jour 1? Observer minutieusement... Rappels: - si oui, la galerie d'orientation est validée et interprétable - si non, les résultats de la galerie ne sont pas interprétables (et donnés sous réserver, le temps de refaire la manipulation) Quelles caractères culturaux peut-on indiquer?