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Il est également utilisé comme contre-colorant dans plusieurs autre colorations (méthode de Moeller, Macchiavello, Stamp, Ziehl-Neelsen.. ) aspect« épingle de sécurité » Après avoir effectué le frottis bactérien (étalement, fixation) Placer la lame sur un support de coloration et l'inonder de bleu de méthylène. Laisser agir pendant 1-3 minutes Laver doucement la lame avec de l'eau distillée, égoutter l'excès d'eau, éponger (ne pas frotter) avec du papier absorbant et laisser les lames sécher complètement à l'air. Examiner à l'objectif x100 à immersion (avec une goutte d'huile) avec un éclairage important (diaphragme ouvert) Couler une solution de bleu de méthylène sur un frottis Après 1-3min rincer à l'eau de robinet Sécher entre deux feuilles de papier buvard puis observée à l'immersion Recherche de leucocytes dans les selles diarrhéiques Déposer sur une lame microscopique une petite goutte de mucus fécal ou de selle liquide. Ajouter un égal volume de bleu de méthylène (bleu de Loeffler).
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Les organismes d'un échantillon seront de la même couleur, même si l'échantillon contient plus d'un type d'organisme. ◈ Dans certains cas, la coloration au bleu de Méthylène donne de meilleurs résultats que la coloration de Gram. Parmi ces cas: Le bleu de méthylène (selon Löffler) a été traditionnellement utilisé pour colorer Corynebacterium diphtheriae pour l'observation des granules métachromatiques. Y. pestis, Lorsqu'elle est colorée au bleu de méthylène, elle présente une coloration intense à chaque extrémité du bacille, appelée coloration bipolaire, ce qui lui donne un aspect « épingle de sécurité ». Burkholderia pseudomallei: aspect bipolaire typique en « épingle de sécurité ». Dans le liquide céphalo-rachidien, permet de mieux contraster les bactéries à Gram négatif, Neisseria meningitidis et Haemophilus influenzae et le fond Haemophilus ducreyi colorées au bleu de méthylène, permettant d'observer l'aspect typique en « chaîne de vélo ». Respecte mieux la structure des cellules que le Gram.
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Utilisation en médecine [ modifier | modifier le code] On l'utilise aussi en médecine; comme traceur des vaisseaux sanguins; et en cancérologie comme colorant dans la technique du ganglion sentinelle. Toxicologie, allergologie [ modifier | modifier le code] Plusieurs colorants bleu induisent des réactions allergiques (périopératoires notamment dans le contexte médical). Ces allergies ont commencé à être décrites dans les années 1960, avec une incidence qui varie selon les études. Une étude multicentrique et randomisée ( ALMANEC) et un travail de biopsie ganglionnaire ( NEW START) conduit au Royaume-Uni, a conclu que 72 patients parmi 7 917 (soit 0, 9%) ont eu des réactions allergiques au bleu patenté V. Chez 23 patients (0, 3%) les réactions étaient modérées ( urticaire, prurit, rash) et 5 (0, 06%) étaient sévères ( hypotension nécessitant un traitement vasopresseur) [ 3]. Ce sont les triarylméthanes (en) ( bleu patenté, bleu isosulfan) et plus rarement le bleu de méthylène [ 3]. Ces colorants sont souvent omis dans le protocole d' anesthésie; or ils ne doivent pas être oubliés de la liste des produits suspecté d'avoir déjà généré une allergie (tout comme le latex, la chlorhexidine …).
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