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Sunday, 14 July 2024
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Cet appareil, le plus largement utilisé qui soit fondé sur la cytométrie en flux, a donné n […] Lire la suite IMMUNITÉ, biologie Écrit par Joseph ALOUF, Michel FOUGEREAU, Dominique KAISERLIAN-NICOLAS, Jean-Pierre REVILLARD • 21 522 mots • 11 médias Dans le chapitre « Caractéristiques et identification »: […] En microscopie optique, après étalement, fixation et coloration de suspensions cellulaires obtenues à partir du sang de la lymphe ou d'organes lymphoïdes, on distingue aisément lymphocytes et plasmocytes. Les petits lymphocytes se présentent comme des cellules rondes (fig. 4), d'une taille à peine supérieure à celle des globules rouges, d'un diamètre de 7 à 8 μm. Le noyau arrondi ou encoché occup […] Lire la suite Voir aussi CYTOMÉTRIE PAR ANALYSE D'IMAGES Recevez les offres exclusives Universalis Pour citer l'article José PIERREZ, Xavier RONOT, « CYTOMÉTRIE EN FLUX », Encyclopædia Universalis [en ligne], consulté le 23 mai 2022. URL:

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Principe de l'analyse L'analyse du cycle cellulaire utilise le colorant nucléaire DAPI pour mesurer la teneur en ADN. Le DAPI se lie spécifiquement à l'ADN double brin. Il n'est donc pas nécessaire d'éliminer l'ARN avant de réaliser les mesures de la teneur en ADN. C'est en revanche une étape préalable avec d'autres colorants couramment utilisés pour mesurer les phases du cycle cellulaire, tels que l'iodure de propidium (PI). À l'aide de la microscopie en fluorescence et de l'analyse d'images, la quantification de la teneur en ADN et les mesures des phases du cycle cellulaire sont automatisées. Les préparations d'échantillons peuvent être chargées dans l'un des deux types de lames: NC-Slide A2™ à 2 chambres NC-Slide A8™ à 8 chambres Les échantillons sont analysés à l'aide du cytomètre imageur avancé NucleoCounter ® NC-3000™ où la fluorescence cellulaire est quantifiée par des histogrammes affichant la teneur en ADN. Les marqueurs affichés dans les histogrammes peuvent être utilisés pour identifier les cellules à différents stades du cycle cellulaire.

A) La fraction de cellules positives pour l'Annexine V et pour le PI a été déterminée par cytométrie en flux (volet supérieur) et cytométrie d'image (volet inférieur). Chaque tarte représente la moyenne de six échantillons (trois échantillons indépendants analysés en double). B) Micrographie de cellules CHO traitées au CPT. La micrographie a été produite par superposition d'images capturées respectivement dans les canaux bleu (Hoeschst-33342), vert (Annexine V-FITC) et rouge (PI) du NucleoCounter® NC-3000™. Les flèches indiquent les quatre populations différentes présentes dans les échantillons. Le grossissement optique de l'instrument est ×2. Visualiser l'ensemble de données dans l'affiche PDF. Conclusion « Nous avons utilisé un cytomètre en image, le NucleoCounter ® NC-3000™, pour quantifier différents événements du processus apoptotique. Comparé à la cytométrie en flux (BD LSRII), le NC-3000™ a démontré une détermination précise et rigoureuse de la translocation de la phosphatidylsérine, de l'activation de la Caspase 3/7 et de la dépolarisation du potentiel de la membrane mitochondriale.